El síndrome de Hermansky-Pudlak (HPS) comprende once trastornos multisistémicos autosómicos recesivos que comparten la diátesis hemorrágica y el albinismo, causados por alteraciones en once genes (HPS1 a HPS11) implicados en la biogénesis y función de orgánulos similares a lisosoma (LRO), como los gránulos densos de las plaquetas. Conocer el subtipo de HPS es importante tanto para el pronóstico como para el manejo clínico de los pacientes, ya que en esta enfermedad hay relación genotipo-fenotipo y ciertas manifestaciones clínicamente relevantes en distintos órganos se asocian preferentemente a mutaciones en ciertos genes HPS

Se reclutó, en el marco del Proyecto Español de Trastornos Plaquetarios Congénitos, a una mujer de 25 años (IC) con albinismo oculocutáneo, hipoplasia macular en ambos ojos, transiluminación del iris, epistaxis frecuente de larga duración y menstruación irregular (ISTH-BAT=4). Su hermana, presentaba albinismo leve y epistaxis ocasionales (ISTH-BAT=1). Las enfermas no manifestaban otras características clínicas relevantes. Se realizó: recuento sanguíneo completo y frotis convencional, inmunotinción en frotis de una batería de proteínas plaquetarias (P-IF), agregación plaquetaria, expresión de glicoproteínas (GPs), secreción de P-selectina y CD63 inducida por agonistas mediante citometría de flujo, microscopía electrónica simple en plasma rico en plaquetas (PRP) por técnica whole-mount (WM). Se analizaron sus ADNs mediante secuenciación de alto rendimiento de un panel de 90 genes (HTS-panel). Las variantes candidatas se confirmaron por Sanger. También secuenciamos mediante secuenciación por nanoporos (Oxford Nanopore Technologies), las regiones en las que se englobaban los genes HPS, mediante enriquecimiento informático usando el dispositivo MinION. Analizamos las secuencias con pipelines propias, que incluyen alineamiento al genoma de referencia con minimap2 y la llamada de variantes estructurales usando Sniffles

Las pacientes mostraron recuentos y volumen plaquetarios normales. La agregación plaquetaria era deficiente (20-25%) con ácido araquidónico, TRAP y colágeno, pero normal con ADP y ristocetina. Las plaquetas mostraron niveles normales de GPs (Ib/IX, IIb/IIIa, Ia, VI). La secreción de P-selectina estaba ligeramente reducida (10-50%), mientras que la liberación de CD63 fue ausente. La probando mostro en P-IF ausencia de tinción de CD63, pero tinción normal de CD62 y Lamp2. (Fig 1A). El análisis WM demostró un grave defecto en el número de gránulos densos en ambas hermanas. El análisis de ADN identificó la variante candidata heterocigótica c.632G>C [p.Gly211Ala] en HPS6 en ambas hermanas. El hermanastro sano no mostró disfunción plaquetaria, ni deficiencia de gránulos, y no es portador de la mutación. La secuenciación por Nanoporo reveló en ambas hermanas la presencia en homocigosis de una deleción de 10kb que afectaba al gen HPS5 (Fig 2).

El fenotipo plaquetario y la HTS-panel son valiosos en el diagnóstico de los pacientes con albinismo y sospecha de HPS. La P-IF de frotis es un método simple que también puede ser útil en el diagnóstico de laboratorio de estos enfermos. Finalmente la secuenciación de secuencias largas mediante nanoporos es una nueva tecnología útil para el diagnostico o identificación de alteraciones moleculares grandes